DESENVOLVIMENTO DE KIT DIAGNÓSTICO PARA LEISHMANIOSE TEGU-MENTAR POR PCR-LAMP

Descrição

O conjunto de doenças das leishmanioses é inclusa no grupo de doenças negligenciadas de acordo com a Organização Mundial da Saúde. Todas as formas da doença são causadas pela picada de um inseto flebotomíneo fêmea infectado por parasitos do gênero Leishmania. O Brasil está dentre um dos principais países endêmicos tanto na forma visceral, pela infecção por L. infantum, quanto na cutânea, as principais espécies causadoras da doença no país, são L. amazonensis, L. braziliensis, L. guyanensis, L. lindenbergi, L. lainsoni e L. shawi. Os principais testes diagnósticos atuais são sorológicos e parasitários, porém ambos são limitados e propen-sos a confusões diagnósticas. Com a descontinuação do teste de Montenegro uma grande la-cuna no diagnóstico das leishmanioses foi aberto, portanto o desenvolvimento de novos for-mas de diagnóstico que seja sensível, precisa e de baixo custo são essenciais. Técnicas de bio-logia molecular possuem diversas vantagens para uso, porém são altamente custosas e reque-rem equipamentos especializados. Porém com o desenvolvimento da técnica de PCR-LAMP o uso da biologia molecular se torno mais prática, rápida e barata. Portanto o objetivo do presen-te estudo é o desenvolvimento de primers inéditos para identificação de parasitos Leishmania a nível de espécie e gênero, com desenvolvimento de detecção visual, por métodos colorimé-tricos e por tira imunocromatográfica de fluxo lateral. Para isso conjuntos de primers específi-cos para o gênero Leishmania e para as espécies-específicas de L. amazonensis e L. infantum serão desenhados, padronizados em relação as condições de reação, concentração de MgSO4, tempo de incubação, temperatura, limite de detecção e especificidade para cada conjunto de primer. Em seguida será realizado a padronização dos testes colorimétricos de Calceína/ Clore-to de Manganês e de Verde Malaquita. Com preparo de reação para uso nas tiras LFD, com padronização da liofilização da reação e teste de estabilidade dos mesmos. Após todos os pa-râmetros estabelecidos e testados, será realizada a validação do teste com uso de amostras de DNA extraídas de amostras biológicas de pacientes confirmadamente infectados. Além de aplicação de atividades de extensão para conscientização das comunidades a certa da doença e treinamento de profissionais de saúde quanto ao uso dos kits.

Palavras-chave

• Leishmanioses
• Diagnóstico
• Lamp PCR

Grupo de pesquisa

Parasitologia, Virologia e Epidemiologia Molecular

Financiamento

Com financiamento