Extração de DNA a partir de fontes limitadas: abordagens metodológicas para garantir qualidade e integridade genética

Descrição

A extração de DNA constitui etapa essencial nas análises em Biologia Molecular, sendo determinante para o sucesso de técnicas como a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), o sequenciamento genético e a clonagem de genes. Nesse contexto, a obtenção de DNA com qualidade, integridade e quantidade adequadas é fundamental, sobretudo quando se utilizam amostras biológicas escassas, como fios de cabelo e raspado bucal, que apresentam limitações quanto à disponibilidade de material e maior suscetibilidade à degradação e à presença de inibidores. Diante disso, o presente estudo tem como objetivo geral analisar dois métodos de extração de DNA, Kit G-Spin™ e acetato de potássio, a partir de fontes biológicas limitadas, considerando critérios de quantidade, qualidade e desempenho na amplificação por PCR. A metodologia adotada consiste na análise de 10 amostras, sendo cinco de raspado bucal e cinco de fios de cabelo para cada método, coletadas por meio de swab e extração manual com pinça, respectivamente. As amostras serão submetidas aos protocolos de extração específicos de cada método, seguidos de quantificação e avaliação da pureza por espectrofotometria (NanoDrop®) e análise da integridade por eletroforese em gel de agarose. A eficiência do DNA extraído será verificada por meio da amplificação do gene da β-globina humana (HBB) via PCR, utilizando primers específicos, com posterior visualização dos produtos em gel de agarose sob luz UV. Espera-se identificar o método mais eficiente quanto ao rendimento, pureza e integridade do DNA, bem como sua capacidade de amplificação, além de avaliar a viabilidade técnica e econômica dos protocolos, contribuindo para a otimização de práticas laboratoriais e ampliação do uso de amostras não invasivas em análises moleculares.