Investigação da dinâmica funcional e genética de fibroblastos de onça-parda durante o cultivo in vitro, sincronização do ciclo em G0/G1 e clonagem interespecífica

Descrição

A população de onça-parda está reduzindo constantemente, gerando desequilíbrios ecológicos, e ameaçando populações silvestres e humanas. A clonagem por transferência nuclear de célula somática pode ser usada para a conservação da espécie. Uma série de fatores determina o sucesso do desenvolvimento de embriões clones, bem como o uso desta biotecnologia para a geração de conhecimento da espécie, tais como as condições de cultivo de fibroblastos, estágio do ciclo celular e sua habilidade de reprogramação após transferência para oócitos enucleados. Embora a clonagem tenha tido sucesso em algumas espécies, a eficiência é baixa e os protocolos necessitam ser adaptados para cada espécie, como a onça-parda que possui características biológicas únicas. Neste sentido, nós hipotetizamos que as condições de cultivo, criopreservação, sincronização em G0/G1 de fibroblastos de onça-parda podem ser otimizadas e promover taxas de sucesso na clonagem interespecífica. Evidências com outros carnívoros sugerem que a manipulação e a sincronização do ciclo têm um impacto significativo na qualidade dos embriões. Portanto, este projeto visa estudar a dinâmica funcional e genética de fibroblastos de onça-parda cultivados in vitro, com foco na sincronização do ciclo em G0/G1 e sua aplicação na clonagem interespecífica. A pesquisa busca compreender os mecanismos celulares que podem melhorar a eficiência da clonagem e auxiliar na conservação da espécie. Para tanto, a estratégia metodológica envolve (i) avaliação das condições de cultivo de fibroblastos, (ii) sincronização em G0/G1, e (iii) aplicação da clonagem interespecífica, compreendendo a habilidade molecular destas células durante a reprogramação. A análise das respostas celulares e moleculares permitirá estabelecer os protocolos para clonagem e aumentar a taxa de sucesso. Finalmente, espera-se contribuir para a preservação destas espécies ameaçadas de extinção por meio de ensaios de reprogramação nuclear.