Caracterização da transição epitélio-mesenquimal em modelos de cultivo celular para estudos do câncer

Descrição

O câncer é um conjunto complexo de doenças que possuem alarmantes taxas de morbimortalidade. Dentre os tipos, o câncer de mama é a principal causa de óbitos por câncer em mulheres em todo o mundo, e no Brasil, estima-se a ocorrência de 70 mil novos casos por ano nos próximos anos. A progressão das neoplasias, em especial, as malignas, é alvo de estudos em todo o mundo. Dentre os diferentes atores que contribuem para o estabelecimento e para a progressão no chamado microambiente tumoral (MAT), têm-se alterações celulares importantes que levam a ocorrência de um processo conhecido como transição epitélio-mesenquimal (TEM), fenômeno que tem sido relacionado a rápida progressão, a invasão, à metástase e a resistência quimioterápica das células cancerígenas. Neste cenário, estudos não clínicos em cultivo celular são extremamente relevantes para melhor compreensão do câncer, bem como para avaliação de tratamentos eficazes neste contexto. Assim, neste projeto, reforçamos o nosso interesse em contribuir com estudos na área e objetivamos estabelecer protocolos em modelos 2D e 3D de cultivo celular usando linhagens de células de câncer de mama para investigar a TEM. Para tal, linhagens humanas de adenocarcinoma mamário (MCF-7 e MDA-MB-231-triplo negativa) serão utilizadas. Como os estudos com as linhagens em modelos 2D já são rotineiros no laboratório, o primeiro momento será construir os esferoides, protocolo já padronizado no laboratório (dados ainda não publicados) e ampliar as informações sobre a sua viabilidade em tempos superiores a 7 dias usando os métodos de MTT e resazurina por espectrofotometria, e marcação com DAPI e F-actina para análise em microscopia de fluorescência. Em seguida, as células em condições 2D e 3D (cada linhagem será testada em separado) serão estimuladas com TGF-𝛽 (10-30 ng/mL) ou IL-1𝛽 (1-5 ng/mL) por 48 ou 72h, e analisadas frente a viabilidade e morfologia celular, bem como a presença de marcadores de TEM, pan-citoqueratina e vimentina. Como controle, células expostas apenas a meio de cultura adequado para cada tipo celular será utilizado. O perfil de marcadores de TEM também serão avaliados por espectroscopia RAMAN. Com isso, espera-se neste projeto, contribuir para o estabelecimento de protocolos relevantes para o estudo de substâncias isoladas ou em combinações para o tratamento do câncer. Além disso, este estudo oferece aos estudantes a possibilidade de aprender e avançar nos estudos com cultivo celular, com metodologias atuais, contribuindo para o incremento de conhecimento científico, para a formação de recursos humanos com elevado nível científico com know-how nesta área do conhecimento para atividades acadêmico-científicas aplicadas à saúde, promovendo o intercâmbio entre as áreas Biológicas, da Saúde e Ciências Exatas (Física), e a comunicação entre graduandos, pós-graduandos e pesquisadores doutores da UFAL.