Regulação da homeostase de cobre em Histoplasma: programa transcricional mediado por Ace1

Descrição

As doenças fúngicas têm causado um impacto significativo na saúde humana. Estima-se que estas moléstias causem aproximadamente 3,8 milhões de mortes anuais. Apesar da importância, estas doenças são negligenciadas pelos sistemas de saúde, investimento em pesquisa e controle. Dentre estas moléstias destacam-se a Histoplasmose (HPM) e a Cromoblastomicose (CBM) causadas pelo H. capsulatum e F. pedrosoi, respectivamente. A virulência destes patógenos, dentre outros aspectos, é também dependente da habilidade de controlar os níveis do micronutriente cobre durante a infecção, pois o hospedeiro mamífero utiliza tanto da essencialidade quanto da toxicidade deste metal como estratégia antifúngica. O conhecimento sobre a homeostase de cobre em fungos é limitado à identificação e caracterização funcional de transportadores, chaperonas e reguladores. Para H. capsulatum até o momento foram caracterizados 2 transportadores e um regulador da homeostase, enquanto para F. pedrosoi não existe na literatura trabalhos sobre o assunto. Portanto, aspectos sobre os complexos de regulação envolvidos na homeostase de cobre, dinâmica do programa transcricional, das funções de genes (F. pedrosoi), bem como definição de motivos de ligação e estrutura dos reguladores ainda são ausentes. Devido a importância destes fenômenos para virulência dos fungos este projeto objetiva caracterizar os complexos de regulação da homeostase de cobre bem como o programa transcricional da adaptação a cenários com diferentes disponibilidades do metal. Para atingir o objetivo proposto serão realizadas: abordagens de imunoprecipitação de cromatina seguida de sequenciamento massivo (Chip-Seq) utilizando como alvo os fatores de transcrição Ace1, Mac1 e RNA polimerase; ensaios de co-imunoprecipitação de parceiros de interação de Ace1 e Mac1 seguidos por proteômica; análise funcional de genes da homeostase de Cu; decifrar a estrutura de Ace1por cristalografia; e relacionar estes aspectos a virulência dos fungos.