AVALIAÇÃO DOS EFEITOS DO EXTRATO HIDROALCOÓLICO LIOFILIZADO DA CASCA DO FRUTO DA Spondias tuberosa ARRUDA SOBRE O ESTRESSE OXIDATIVO E SENESCÊNCIA ENDOTELIAL INDUZIDOS POR ANGIOTENSINA II EM CÉLULAS ENDOTELIAIS DA VEIA UMBILICAL HUMANA (HUVECS)

Descrição

O envelhecimento é um processo biológico associado ao acúmulo progressivo de alterações celulares e moleculares que comprometem a homeostase e favorecem o desenvolvimento de doenças. Em nível celular, destaca-se a senescência celular como um dos principais hallmarks do envelhecimento, caracterizada pelo aumento da produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) decorrente do estresse oxidativo e pelo aumento da atividade da β-galactosidase associada à senescência (SA-β-gal), importante biomarcador desse processo. Nesse contexto, compostos naturais com atividade antioxidante são investigados como alternativas terapêuticas, destacando-se a Spondias tuberosa Arruda pelo seu potencial farmacológico na modulação dos processos oxidativos e da senescência celular. Este estudo avaliará os efeitos do extrato hidroalcoólico liofilizado da casca do fruto de Spondias tuberosa Arruda (EHLST) em células endoteliais da veia umbilical humana (HUVECs) submetidas ao modelo de senescência celular induzida por angiotensina II. Inicialmente, será realizada a padronização do modelo experimental por meio da determinação da concentração e do tempo de exposição à Ang II capazes de induzir alterações compatíveis com o estado de senescência sem promover citotoxicidade excessiva. Para isso, as células serão expostas a diferentes concentrações de Ang II (10⁻⁸, 10⁻⁷, 10⁻⁶, 10⁻⁵ e 10⁻⁴ mol/L) por períodos de 24, 48 e 72 horas. Após definição das condições experimentais, serão realizados os ensaios farmacológicos para investigação dos efeitos do EHLST sobre parâmetros relacionados à viabilidade celular, estresse oxidativo e senescência utilizando os métodos de MTT (brometo de 3-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-2,5-difenil-2H-tetrazólio), DHE (di-hidroetídio) e SA-β-gal respectivamente. Os protocolos serão conduzidos em dois grupos experimentais: Basal e Ang II. O grupo Basal será constituído por HUVECs cultivadas e tratadas apenas com veículo (meio DMEM contendo 2% de SFB) ou tratadas com EHLST nas concentrações de 0,01; 0,05; 0,1; 0,5 e 1,0 μg/mL, na ausência do estímulo indutor de senescência por 48 horas. O grupo Ang II será composto por células tratadas apenas com veículo (Ctl), células expostas à concentração padronizada de Ang II e células submetidas simultaneamente ao tratamento com Ang II e EHLST nas diferentes concentrações estabelecidas por 48 horas. Os resultados poderão contribuir para o entendimento do potencial farmacológico da S. tuberosa e para a prospecção de novos agentes bioativos com potencial aplicação na senescência celular, além de colaborar para a formação de recursos humanos envolvidos no projeto.