Caracterização das proteínas tirosina fosfatases (PTPs) no parasita protozoário Perkinsus marinus

Descrição

A ostreicultura constitui uma atividade econômica e nutricional estratégica para o desenvolvimento sustentável de comunidades costeiras. Entretanto, sua produtividade é frequentemente comprometida por enfermidades infecciosas, entre as quais se destaca a perkinsiose. Causada pelo protozoário parasita Perkinsus marinus, essa doença afeta diretamente os hemócitos e a resposta imune dos moluscos bivalves, resultando em elevadas taxas de mortalidade em cultivos ao redor do mundo. Em diversos microrganismos patogênicos, as proteínas tirosina-fosfatases (PTPs) desempenham papéis essenciais na virulência e na regulação dos processos de infecção celular. Contudo, os mecanismos moleculares associados a essas enzimas permanecem inexplorados no gênero Perkinsus. Nesse contexto, o presente projeto tem como objetivo identificar e caracterizar as PTPs presentes no genoma de P. marinus. A metodologia consistirá inicialmente na prospecção e caracterização in silico das sequências codificantes de PTPs no genoma do parasita por meio de ferramentas de bioinformática e modelagem molecular. Sequencialmente, os genes-alvo selecionados serão amplificados via PCR, clonados no vetor de expressão pET-14b e expressos em sistema heterólogo utilizando cepas de Escherichia coli. As proteínas recombinantes purificadas por cromatografia de afinidade por metal imobilizado terão suas condições ótimas de atividade avaliadas in vitro frente ao substrato sintético p-nitrofenil fosfato (pNPP) sob diferentes gradientes de pH e temperatura. Como resultados, espera-se elucidar os primeiros dados bioquímicos e estruturais sobre as PTPs de P. marinus, validando seu potencial como alvos moleculares terapêuticos e gerando subsídios biotecnológicos para o controle da perkinsiose, além de impulsionar a formação de recursos humanos na área de biologia molecular e bioquímica.